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HPLC分析中怎樣解決流路中的氣泡問題

更新時間:2011-10-23      點擊次數(shù):5135

HPLC分析過程中常出現(xiàn)的問題:系統(tǒng)的流路中存在氣泡。

  由于氣泡的存在,會造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰,嚴重時會造成分析靈敏度下降;氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩(wěn)定,使基線起伏。

  造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條:

  一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈;三是在注入樣品時不注意混入了空氣。

  為了避免這類問題的出現(xiàn),液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理。

  常用的脫氣方法有以下幾種:

  1.吹氦脫氣法使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣,在0.1Mpa壓力下,以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑,脫氣效果較好,但在國內(nèi)因氦氣價格較貴,本法使用較少;

  2.加熱回流法此法的脫氣效果較好;

  3.抽真空脫氣法此時可使用微型真空泵,降壓至0.05-0.07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化,故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應預先脫氣后再進行混合,以保證混合后的比例不變。

  4.超聲波脫氣法它是目前實驗室使用zui廣泛的脫氣方法,將配制好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便,基本能滿足日常分析的要求。

  5.在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中,并結(jié)合膜過濾器,實現(xiàn)了流動相在進入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法,并適用于多元溶劑體系。

  二,在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。

  三,在液相色譜系統(tǒng)開始工作前,可以用注射器連接恒流泵的排空閥,抽入流動相,將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。

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