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依利特色譜柱使用過(guò)程中下列情況遇到過(guò)嗎?

更新時(shí)間:2020-04-19      點(diǎn)擊次數(shù):1634
   利用依利特色譜柱先將混合物分離,然后利用檢測(cè)器依次檢測(cè)已分離出來(lái)的組分。色譜柱的直徑為數(shù)毫米,其中填充有固體吸附劑或液體溶劑,所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相。與固定相相對(duì)應(yīng)的還有一個(gè)流動(dòng)相。流動(dòng)相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應(yīng)的氣體,一般為氮或氫氣。待分析的樣品在色譜柱頂端注入流動(dòng)相,流動(dòng)相帶著樣品進(jìn)入色譜柱,故流動(dòng)相又稱為載氣。載氣在分析過(guò)程中是連續(xù)地以一定流速流過(guò)色譜柱的;而樣品則只是一次一次地注入,每注入一次得到一次分析結(jié)果。
  在依利特色譜柱實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常遇到的情況:
  (1) 新的色譜柱,直接上分析條件來(lái)分析樣品,發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
  (2) 新的色譜柱,使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。
  (3) 新的色譜柱,發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。
  (4) 色譜柱使用不頻繁,一開(kāi)始分析樣品效果比較好,但是,在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
  (5) 色譜峰形異常,基線不穩(wěn)。
  當(dāng)發(fā)生以上情況,請(qǐng)仔細(xì)檢查,是否有某個(gè)操作疏忽了?
  1)測(cè)試柱性能
  通常情況下,我們建議用戶在拿到色譜柱后,件事情就是在一臺(tái)性能完好的儀器系統(tǒng)上,按照廠家說(shuō)明書對(duì)色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。其實(shí),對(duì)于一個(gè)合格的色譜分析工作者來(lái)說(shuō),拿到一根新色譜柱,要開(kāi)始一個(gè)課題之前,都會(huì)這樣做,目的有二:1、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。2、將檢測(cè)結(jié)果小心保存, 當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí),在檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比,來(lái)進(jìn)一步排查原因。
  2)當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí),注意過(guò)渡
  在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí),一定要注意應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,造成系統(tǒng)堵塞。另外,在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí),要仔細(xì)檢查,段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。
  3)當(dāng)更換色譜柱時(shí),原來(lái)的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化
  首先,如果之前開(kāi)發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過(guò)別的樣品,那么之前的樣品或使用的流動(dòng)相對(duì)這個(gè)樣品分析可能有干擾,只能重新找條件。建議:開(kāi)發(fā)方法時(shí)使用新的色譜柱。(其次,如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況,可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同,造成了選擇性的細(xì)微差異 ,需要調(diào)整條件,并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會(huì)改變)。再次,如果是更換了同品牌型號(hào)的新的色譜柱發(fā)生這種情況,請(qǐng)檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一開(kāi)始只是勉強(qiáng)分開(kāi)(Rs小于1.5),那只能說(shuō)明方法沒(méi)有優(yōu)化好,需要再次進(jìn)行優(yōu)化。
  4)樣品及前處理
  樣品要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純,配流動(dòng)相的水應(yīng)該是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
  5)色譜柱基線問(wèn)題
  通常情況,基線問(wèn)題是由于系統(tǒng)或者流動(dòng)相引起的,和色譜柱關(guān)系不大。
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